牛血清白蛋白(BSA)是牛血清中的一种球蛋白,包含 607 个氨基酸残基,分子量为 66.446KDa,等电点为 4.7。
应用: 牛血清白蛋白(BSA)在生化实验中有广泛的应用,例如在 WB 实验中加入 BSA,通过提高溶液中蛋白质的浓度,对酶起保护作用。 防止酶的分解和非特异性吸附,能减轻有些酶的变性减轻不利环境因素,如加热、表面张力及化学因素引起的变性。
测定蛋白浓度 按 50:1 配置 BCA 工作液。 10ulC 液(蛋白标准)+90ulPBS 液稀释成 0.5 mg/ml 的蛋白标准液。 再分别以 0、1、2、4、8、12、16、20ul 将蛋白标准液加入 96 孔板的第 1~8 标准孔中,在其他样品孔中加入 10ul 待测样品。 分别加 PBS 定容至 20ul。 各孔中加入 200ulBCA 工作液,室温放置 2 小时。 用酶标仪测定蛋白浓度:测定 A562,依标准曲线算出蛋白浓度。
1、蛋白质
是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白、球蛋白。纤维粘连素细胞促进细胞附着;a2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用;胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着;转铁蛋白能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用。
2、多肽
血小板促生长因子能促细胞分裂,是多肽家庭的主要成员,是主要的促细胞增殖因子;成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因子等,血清中含量虽很少,但对细胞生长也有一定作用。
3、激素
激素对细胞的作用是多方面的。
胰岛素:促进细胞摄取葡萄糖和氨基酸,与促细胞分裂有关。
类胰岛素生长因子:能与细胞表达的胰岛素受体结合,从而有胰岛素同样的作用。
促生长激素:促细胞增殖效应。
4、其他成份
氨基酸、葡萄糖、酮酸等对多种营养成分的合成培养基意义不大。与蛋白相结合状态的微量元素对细胞培养有意义。
作用
BSA一般做为稳定剂被用于限制酶或者修饰酶的保存溶液和反应液中,因为有些酶在低浓度下不稳定或活性低。加入BSA后,它可能起到“保护”或“载体”作用,不少酶类添加 BSA后能使其活性大幅度提高。不需要加BSA的酶加入BSA一般不会受到什么影响。对多数底物DNA而言,BSA可以使酶切更完全,并可实现重复切割。在37℃,酶切反应超过1h时,BSA可以使酶更加稳定,因为在不含BSA的反应缓冲液中,许多限制性内切酶在37℃下只能存活10"20min甚至更短的时间。而BSA可以结合缓冲液或底物DNA中抑制限制性内切酶活性的金属离子和其它化学物。
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