1.原代细胞混匀操作要领

　　火焰消毒吸管，用Hanks液冷却和湿润管内壁（这是因为刚分离的组织细胞易粘在管壁上）。

　　吸管头插入管底。

　　用吸管反复轻轻吹打组织块。

　　2.器械的使用操作要领

　　用工作台消毒镊子取浸泡在酒精中消毒的器械

　　器械置无菌干纱布内擦一下，迅速通过火焰，冷却后使用

　　用过的器械置另一加盖的器皿中再消毒

　　器械按浸泡消毒的顺序使用

　　各套再消毒器械不可混用

　　3.除去组织块多余水分的操作要领

　　用吸管将组织块推向青霉素瓶一角，然后将有组织块的瓶面翻向上方，吸去流向对侧的多余水分。

　　注意：多余水分若不除去，会使组织块剪切不细，消化后的细胞悬液清亮（细胞数少），并可见消化液中有线状或絮状物漂浮。

　　4.细胞计数操作要领

　　用吸管混匀待计数的细胞悬液

　　将一小滴细胞悬液从盖玻片与载玻片交接部位滴入细胞计数池中

　　沉降1分钟，低倍镜下计数血球计数板四大中格中的结构完整的细胞，小细胞团计数为1

　　计数时，如果细胞压在格上，则数上不数下，数左不数右。然后按下式计算出每毫升悬液中的细胞数。

　　（四大中格细胞数/4）×10000=细胞数/毫升

　　注：细胞计数板上，每一中格体积为0.1立方毫米

　　六、原代培养注意事项

　　细胞生长密度不高时，不能急于传代培养

　　原代培养的贴壁细胞需控制消化时间

　　吹打已消化的细胞要轻巧，既不能听到有明显的吹打声，又不能有大量泡沫在悬液中形成，以尽可能减少对细胞的机械损伤

　　传代细胞接种数量应多一点，以利于细胞的生存和繁殖。如果消化分离的细胞悬

　　液有组织块，也一并传入到培养瓶，尽量减少细胞损失。

　　传代细胞培养pH偏低些