(1) 实验开始前向小鼠腹腔注射0.5ml含40μg刀豆球蛋白a的磷酸盐缓冲液(PBS)。
(2) 3天后,断颈处死小鼠,75%酒精消毒小鼠皮肤。
(3) 置动物于解剖台上,用针头固定四肢,双手持镊撕开皮肤拉向两侧,暴露出腹膜,但勿伤及腹膜壁。
(4) 再用70%酒精擦洗腹膜壁后,用注射器吸10ml 无菌PBS液注入腹腔中,同时从两侧用手指揉压腹膜壁,令液体在腹腔内充分流动。
(5) 用针头轻轻挑起腹壁,使动物体微倾向一侧,使腹腔中液体集于针头下吸取入针管内。
(6) 小心拔出针头,把液体注入离心管中,1000r/min 4℃离心10分钟,弃去上清液,重复两次,加入完全培养液重悬。
(7) 将滤液进行台盼蓝拒染试验,血细胞计数板镜下计数。以 8.0 ×104至 1.0 ×105/mL的密度将细胞以 400µl/孔接种到预先用L-多聚赖氨酸包被的24 孔培养板或 100µl/孔接种 96 孔培养板。
(8) 用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养基培养,细胞培养24-48 h直到融合。
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