一、初代消化培养法

　　1、 准备：取各种已消毒的培养用品置于超净台，紫外线消毒 20 分钟。实验前先洗手并用75%酒精擦拭手至肘部。

　　2、组织处理：把组织块置于烧杯中，用 Hanks 液漂洗 2~3 次，去除血污；如怀疑组织可能污染，可先置于含有青链霉素的混合液中 30~60 分钟。

　　3、剪切：用眼科剪把组织切成 2~3 毫米大小的块，以便于消化。加入比组织块总量多30~50 倍的胰蛋白酶液，然后一并倒入三角烧瓶中，结扎瓶口或塞以胶塞。

　　4、消化：或用恒温水浴，或置于 37℃恒温箱消化均可，消化中每隔 20 分钟应摇动一次，如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。

　　5、分离：在消化过程中见消化液发混浊时，可用吸管吸出少许消化液在镜下观察，如组织已分散成细胞团或单个细胞，立即终止消化，随即通过适宜不锈钢筛，滤掉尚未充分消化开的组织块。低速（500~1000 转/分）离心消化液 5 分钟，吸出上清，加入适量含有血清的培养液。

　　6、计数：用计数板计数，如细胞悬液细胞密度过大，再补加培养液调整后，分装入培养瓶中。对大多数细胞来说，pH 要求在 7.2~7.4 范围，培养液呈微红色，如颜色偏黄，说明液体变酸，可用NaHCO3 调整。

　　7、 培养：置于 36.5℃温箱培养，如用 CO2 温箱培养，瓶口需用纱布棉塞或螺旋帽堵纱布塞易生霉菌，每次换液时需要换新塞。