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细胞冻存和复苏的原则是什么
时间:2024-01-24来源:金少源浏览:

  细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融。细胞冻存是在超低温冷冻状态下长期保存细胞的方法。在-196℃的超低温下,细胞呈休眠状态,因而能长期保存。细胞在冷冻时,常因溶液中电解质浓度增高和冰晶形成而受到损伤,故冻存细胞须悬浮于无毒、低分子质量、高溶解度,并能迅速透入活细胞内的特定保护剂中,如甘油、二甲基亚砜、聚烯吡酮、乙二醇、葡萄糖等,其中前两种常用。冷冻过程中的降温速度对冰晶形成有重大影响,冷冻速度太快,则细胞外结冰时,细胞内水分来不及渗出胞外,以致在胞内形成冰晶,损伤细胞;如冷却过慢,则细胞外溶液结冰时间过长,引起细胞内水分大量渗出,细胞收缩死亡。适宜的降温速度是每分钟1℃降至-70℃后,立即投入液氮罐使速冷至-196℃,可耐长期保存。

  

  细胞的复苏是按一定复温速度将细胞悬液由冻存状态恢复到常温。在-70℃以下的条件下,细胞内的生化反应其缓慢,甚至停止。当恢复到常温状态下,细胞的形态结构保持正常,生化反应即可恢复。在细胞复苏的过程中,如果复温速率不当也可能引起细胞内结冰而造成细胞损失。在复苏时,一般以很快的速度升温,1~2min内恢复到常温,使细胞迅速通过易受损的-5~0℃,细胞内外不会重新形成较大的冰晶,也不会暴露在高浓度溶质的溶液中过长时间,大限度地减少冰晶和溶质对细胞的损伤,使复苏后的细胞保持正常的结构和功能。因此,细胞冻存和复苏的原则是慢冻快融。


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