一、原代培养需要从组织中消化、分离、纯化出单细胞,然后继续进行传代、冻存；

　　二、传代培养首先进行细胞复苏:

1. 应遵守慢冻快融的原则.先将水温锅调至37-38度,取出冻存的细胞迅速放入后交细胞面浸至水面以下不断摇动至融化.

　　2.在无菌台内将培养基加入培养瓶内,然后用无菌吸管从冻存管内取出细胞,置培养瓶内轻轻摇晃,使细胞均匀后置培养箱内培养,24h后换液；也可复苏当时离心（1000rpm 5min左右）后,培养基重悬培养,适时换液.

　　细胞传代:

1. 贴壁细胞:对于贴壁细胞应先吸(倒)尽培养基,吸的越干净越好,以免中和后加入的消化液,使强度减弱.PBS清洗2-3次,去除血清和死细胞,50ml培养瓶加入消化液约0.6ml,按此比例进行消化,(根据配制强度经验),晃动使消化液铺均匀置37度培养箱约2分钟,镜下见细胞收缩变圆或少数脱落后,轻轻振动瓶底使细胞全部脱落,加入2-3ml培养基后,轻轻吹打,使细胞基本成单个悬浮,然后收集离心（1000rpm 5min左右）,新鲜培养基重悬沉淀,加入培养基后继续培养或实验.

　　2.悬浮细胞:一般传代可直接将细胞原液分置其它培养瓶内,加入培养基继续培养,如要高浓度或需更换新培养基,可先离心（1000rpm,5min左右）后加入培养基,轻轻吹匀后,分置其它培养瓶内加入培养基继续培养.