1. 如果采用刺激物，则可在实验前三天腹腔注射3%巯基乙醇酸钠每只2 mL，获得的巨噬细胞数要多一些。不采用刺激物，直接开始下面的步骤。

　　2. 拉颈处死小鼠，在75%酒精浸泡1-2 分钟，移入超净台中，仰卧位固定于解剖板上，碘酒消毒腹部皮肤，酒精绵球脱碘。用手术直剪充分剪开腹部皮肤，暴露腹部肌层，再用酒精绵球消毒腹部肌层。

　　3. 用注射器抽取5mL 含双抗的RPMI 1640 培养基注入腹腔，用绵球轻揉腹部1-2 min，然后，用眼科镊稍提起腹腔，并用眼科剪剪开一个小口，用吸管吸取细胞悬液，移入离心管中(个人认为，此法比用注射器抽吸好一些)。

　　4. 1000 rpm 离心5 min 后，用含双抗的RPMI 1640 培养基洗涤一次，再次离心，重悬细胞于含10% 小牛血清的RPMI 1640 培养液中，如果是作为饲养细胞使用，则选择相应的培养液。台盼蓝拒染法计数，将细胞稀释到目的浓度后，接种即可。

　　5. 如果是作为饲养细胞使用，调整浓度至2x105个/mL，接种到96 孔板中，每孔100-200μL；如 果作为其它实验使用，可以调整成2x106/mL，加到 24 孔平底培养板中，1 mL/孔；5% CO2温箱孵育2 h 后， 换液，并用RPMI 1640 培养基洗1-2 次，弃去未粘附细胞，贴壁细胞为单层的巨噬细胞。