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小鼠腹腔巨噬细胞培养实验步骤
时间:2024-03-20来源:金少源浏览:

  1.如果采用刺激物,则可在实验前三天腹腔注射3%巯基乙醇酸钠每只2 mL,获得的巨噬细胞数要多一些。不采用刺激物,直接开始下面的步骤。

  

  2.拉颈处死小鼠,在75%酒精浸泡1-2分钟,移入超净台中,仰卧位固定于解剖板上,碘酒消毒腹部皮肤,酒精绵球脱碘。用手术直剪充分剪开腹部皮肤,暴露腹部肌层,再用酒精绵球消毒腹部肌层。

  

  3.用注射器抽取5mL含双抗的RPMI 1640培养基注入腹腔,用绵球轻揉腹部1-2 min,然后,用眼科镊稍提起腹腔,并用眼科剪剪开一个小口,用吸管吸取细胞悬液,移入离心管中。

  

  4.1000 rpm离心5 min后,用含双抗的RPMI 1640培养基洗涤一次,再次离心,重悬细胞于含10%小牛血清的RPMI 1640培养液中,如果是作为饲养细胞使用,则选择相应的培养液。台盼蓝拒染法计数,将细胞稀释到目的浓度后,接种即可。

  

  5.如果是作为饲养细胞使用,调整浓度至2x105个/mL,接种到96孔板中,每孔100-200μL;如果作为其它实验使用,可以调整成2x106/mL,加到24孔平底培养板中,1 mL/孔;5%CO2温箱孵育2 h后,换液,并用RPMI 1640培养基洗1-2次,弃去未粘附细胞,贴壁细胞为单层的巨噬细胞。


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