一、提取方法
微血管内皮细胞的提取和培养有酶消化培养法、组织块培养法、免疫磁珠法。
1.酶消化培养法
采用消化酶将对应组织内细胞间质如基质、胶原蛋白、纤维蛋白等解离,使细胞分散,形成单细胞悬液后再接种进行培养的方法。
主要包括:实验动物及日龄的选择(根据取材部位决定动物日龄)→对应部位的取材→组织的剪碎及清洗→加酶消化→离心去酶→计数后接种培养→细胞纯化→细胞鉴定。
2.组织块培养法
是将从体内取出的组织剪切成一定大小的组织块后,接种于培养瓶进行的培养。
主要包括:试验动物及日龄的选择(根据取材部位决定动物日龄)→对应部位的取材→组织的剪切→接种培养。
3.免疫磁珠法
通过在磁珠表面包被具免疫反应性的抗体进行抗原抗体反应,筛选或去除所标记的细胞,达到阳性或阴性选择细胞的目的。
主要包括:实验动物及日龄的选择(根据取材部位决定动物日龄)→对应部位的取材→组织的剪碎及清洗→加酶消化→离心去酶→加入磁珠与细胞孵育→磁珠磁力架分选→收集沉淀技计数→接种培养。
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