产品名称 :  人肺动脉平滑肌细胞永生化
基本形态 :  上皮细胞样

培养条件 :  平滑肌细胞专用培养基 生长特性 贴壁生长

培养环境 :   37℃，5%CO2，95%AIR

细胞传代

1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次：

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3、弃上清，沉淀细胞用 1-2ml 完全培养基重悬，然后按 1:2 比例进行分瓶传代（两个 T25）， 补充新的完全培养基至 5-8ml/瓶，最后放入 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养；

细胞冻存

1、细胞生长至覆盖培养瓶的 80%面积时，弃 T25 培养瓶中的培养液，用 PBS 清洗细胞一次；

2、添加 0.25%胰蛋白酶消化液约 1ml 至培养瓶中，倒置显微镜下观察，待细胞回缩变圆后加入 5ml 完全培养液终止消化，再轻轻吹打细胞使之脱落，然后将悬液转移至 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3、弃上清，沉淀细胞加入 1ml/支的之礼无血清冻存液，混匀后加入冻存管中。

（如：冻一支，加入 1ml 无血清冻存液）

4、将冻存细胞用程序降温盒放入－80℃冰箱即可；如后期要将细胞转入液氮罐中，需在-80℃冰箱存放 24 小时以上。

细胞复苏

1、 从液氮中取出细胞冻存管（注意：佩戴防爆管面具），快速将其置入 37℃水浴中解冻， 直至冻存管中无结晶，然后用 75%的酒精擦拭冻存管外壁；

2、将冻存管中的细胞移至含 5ml 完全培养基的 15ml 离心管中，1000rpm 离心 5min；

3、弃上清，沉淀用 5ml 完全培养基重悬，接种 T25 培养瓶，于 37℃,5%CO2 细胞培养箱中培养；

4、第二天，换用新鲜完全培养基继续培养