MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒

细胞简介

贝MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒是应用新型的水溶性甲腊化合物[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(金翁)，内盐:MTS]快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。

MTS被细胞生物还原成一种可溶于组织培养基的甲股化合物，新陈代谢活跃的活细胞内的脱氢酶类将MTS转化成液态可溶的甲腊化合物，这种甲腊化合物在490nm 的吸收值可以直接在96孔板上测量，而不需要另外作处理。由490nm测量的吸收值所表示的甲腊产物的数量与培养物中活性细胞的数量成正比。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。

MTS溶液可以直接加入到细胞样品中，不需要预配各种成分，MTS溶液很稳定，对细胞没有毒性，可以长时间孵育细胞。MTS法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高，无放射性，检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT, XTT和WST-1高。

试剂盒组成

各组份储存条件

1、染色液2-8℃保存

2、避免反复冻融

【注】

1、长期不用可以-20℃保存。

2、染色液需要长期保存时可以根据使用情况进行小量分装后-20℃保存。

3、试剂拆封后请尽快使用完。

储存条件

2-8°C避光保存

有效期

一年

【注】

1、开盖后组份按要求条件保存。

2、拆封后请尽快使用完！

产品特点

1、易于使用:直接将MTS溶液，加入到细胞中，孵育然后读取吸光度值。

2、快速:在96孔板中进行检测，不需洗涤或收获细胞。也不需要溶解步骤。因为MTS甲腊产物可溶解在组织培养基中。

3、非放射性:不需液闪混合液，不需处理放射性废物（不像[3H]-胸腺咤啶)。灵活:平板被读数后还可以放回温箱继续颜色反应（不像MTT)。

4、安全:不需要挥发性有机溶剂来溶解甲腊化合物(不像MTT)

应用

1、细胞增殖

2、细胞毒性

3、凋亡结果

4、化学灵敏性

5、细胞贴服确定

6、趋化性

样本类型

1、悬浮细胞

2、贴壁细胞

仪器准备

1、带有450nm波长的酶标仪

2、CO2培养箱

3、离心机

4、移液器

5、冰箱

6、冰盒

试剂准备

1、或者HBSS(Hank's Balanced Salt Solution: With: Calcium Magnesium Glucose:Without: Phenol Red。Components: CaCl2(anhydrous) 140mg/L(1.261mM)、MgCl2-6H2O 100mg/L(0.493mM)、MgSO4-7H2O 100mg/L(0.407mM)、KCI400mg/L (5.333mM)、KH,PO: 60mg/L(0.441mM)、NaHCO3,350mg/L(4.167mM)、NaC1 1000mg/L(137.931mM)、Na2HPO4(anhydrous)48mg/L(0.338mM)、D-Glucose 1000mg/L(5.556mM)。

2、PBS 缓冲液(pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X) )(phosphate buffer saline/Dulbecco's PBS:约含8mM Na,HPO,、2mM KH,PO,、137mM NaC1和3mM KC1)。

试剂准备

1、离心管

2、吸头

3、96孔培养板

4、一次性手套

使用注意事项

1、需长时间保存可-20℃避光保存。避免反复冻融，否则将会增加空白吸收，从而影响检测结果。最好小剂量分装，用避光袋或是黑纸、锡箔纸包住避光。2、用培养基或PBS来配制待检测药物。

3、如果待测药物可能有还原性，则测定不含细胞，仅含有MTS的待测药物溶液在490 nm 处的空白吸光度。如果该吸光度很小，则可以直接加入MTS ，如果吸光度相对较大，则需要除去培养基，并用新鲜培养基洗涤细胞两次，然后加入新的100 ul培养基和10 ul MTS进行检测。

4、细胞处理需要小心操作,尽量避免人为的损伤细胞。

5、加MTS溶液后孵育时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定,对于大多数情况孵育1小时即可，白细胞需要培养较长时间。

6、如果不是使用96孔板检测，MTS溶液的用量相应等比例增加即可。

7、有条件的情况下建议采用多通道移液器，可以减少平行孔间的差异。加MTS 试剂时，建议斜贴着培养板壁加，不要插到培养基液面下加，容易产生气泡，会干扰O.D值读数。

活性测定使用方法

1、收集细胞，加细胞悬液100 ul（约5000-10000个细胞）到96孔板（边缘孔用无菌水或PBS填充)。每板设对照（加100pul培养基)。

2、置37C，5%COz孵育过夜，倒置显微镜下观察。3.每孔加入10 ul待检测药物溶液，37°C孵育。

【注】

1、此处以药物处理细胞为例，实际以自己的细胞样品为准。

2、用各种方法制备的细胞模型按下面方法加入 MTS试剂后检测即可。

3、每孔加入10 ul MTS溶液，37°C孵育1-4小时。

【注】

1、此处以96孔板加样为例，实际检测时以自己的细胞培养容器为准。

2、按培养基的用量的10%比例添加MTS试剂即可。

3、测定490 nm各孔的吸光值。

4、同时设置空白孔(培养基和MTS溶液，无细胞)，对照孔（不加药培养基和 MTS溶液，有细胞)，每组设定3-5复孔

【注】

2、复孔数量根据自己实际需要设定，为了降低试剂消耗成本，可以少设复孔

结果分析

1、细胞活力计算:

2、将各测试孔的OD值减去调零孔OD值或对照孔OD值。各重复孔的OD值取平均数。

3、细胞活力%=(加药细胞OD-空白OD/对照细胞OD-空白OD) ×100。

数量测定使用方法

细胞活力计算

1、将先用细胞计数板计数所制备的细胞悬液中的细胞数量，然后接种细胞。

2、按比例（例如:1/2比例)依次用培养基等比稀释成一个细胞浓度梯度，一般要做3-5个细胞浓度梯度，每组3-6个复孔。

3、接种后培养2-4小时使细胞贴壁，然后加MTS试剂培养一定时间后测定O.D值，制作出一条以细胞数量为横坐标(X轴)O.D值为纵坐标(Y轴)的标准曲线。

根据此标准曲线可以测定出未知样品的细胞数量
（使用此标准曲线的前提条件是实验的条件要一致，便于确定细胞的接种数量以及加入MTS后的培养时间)。

注意事项

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损。

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂。

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。