CFSE细胞增殖检测试剂盒

细胞简介

1、CFSE细胞增殖检测试剂盒是利用细胞增殖示踪荧光染料CFSE(CFDA-SE)对细胞增殖情况进行检测的试剂盒。CFDA-SE是一种

可对活细胞进行荧光标记的新型染料，可以标记活体细胞。CFDASE是一种带有琥珀酰亚胺(NHS)的荧光染料，可以结合细胞内的蛋白质。

CFDASE在结构上将酚羟基部位改造成AM体，所以自身不发荧光，荧光背景低，脂溶性高，能够轻易穿透细胞膜，进入细胞内的CFDASE的AM部位能被细胞内酯酶水解生成CFSE，
通过共价结合赖氨酸侧链的氨基而掺入细胞内和细胞表面的蛋白，且结合后发出强的绿色荧光。CFSE的琥珀酰亚胺(NHS)和细胞内蛋白质的氨基部位结合，固定在细胞内，

不会漏出细胞外。CFSE进入细胞后定位于细胞膜、细胞质和细胞核，在细胞核的荧光最强。 

2、在细胞分裂增殖过程中，CFSE的荧光强度会随着细胞的分裂而逐级递减，标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，

因此其荧光强度是亲代细胞的一半，根据这一特性，它可被用于检测细胞增殖，细胞周期的估算及细胞分裂等方面。
而且这种荧光产物能够很好的保持，并且可以用乙醛固定，不会重新泄漏到胞外。

3、CFSE标记细胞的荧光非常均一，优于以前使用的其他细胞示踪荧光探针如PKH26，并且分裂后的子代细胞的荧光分配也更均一。

在细胞分裂增殖过程中，CFSE 标记荧光可平均分配至两个子代细胞中，荧光强度变为亲代细胞的一半，通过流式细胞仪（FL1通道）

根据荧光强度的不同，可检测出未分裂细胞，分裂一次（1/2的荧光强度），二次（1/4的荧光强度），三次（1/8的荧光强度），

以及更多分裂次数的细胞。CFSE可检测分裂次数多达八次甚至更多。经CFSE标记的细胞可用于体外和体内增殖研究，且具有不会

使邻近细胞染色的功能。CFSE的优点在于染色更均匀，因此比起核酸染料，它在区分父子代细胞方面效率更高更准确，比如利用

流式细胞术，您可以轻易区分8-10代淋巴细胞。 

4、CFSE标记的细胞用于体内观察可以长达数周之久，它常被用来做活体细胞检测实验和用荧光电镜观察细胞长期活动的实验。

CFSE毒性小，不影响细胞的增殖能力。此方法操作简单，且不用放射性同位素，不存在安全隐患。可以更快速，

更准确和更安全地得到想要的实验数据。 CFSE标记细胞后通常用流式细胞仪进行细胞增殖检测。最常用于淋巴细胞的增殖检测也可以用于成纤维细胞、NK细胞等其它细胞的增殖检测。 

5、CFSE标记细胞呈绿色荧光，荧光波长：λex=496 nm, λem=516 nm。流式检测时的激发波长可以选择488nm此时的发射波长为516nm，使用流式细胞仪检测时可以采用FL1 detection channel。CFSE标记的细胞除了流式细胞仪检测细胞增殖外，还可用荧光酶标板定量活细胞数目，或者用荧光显微镜进行均一染色的细胞示踪观察。

试剂盒组成

储存条件

2-8°C避光保存

【注】

1、开盖后组份按要求条件保存。

2、拆封后请尽快使用完。

有效期

一年

产品特应用

1、流式细胞仪

2、激光共聚焦

3、荧光显微镜

适用样本

动物细胞

仪器准备

带有450nm滤光片的酶标仪

CO2培养箱

试剂准备

PBS

纯水

耗材准备

移液器吸头

96孔培养板

使用方法

1、旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。

2、染色浓度根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而异。

3、CFSE 母液极易水解，建议分装保存，分装后用封口膜密封管口，再用锡箔纸包裹，最后和干燥剂一起用塑料袋密封，三-20℃冷冻保存。

4、CFSE工作液应现配现用，不能提前配制，因为CFSE吸水会分解，影响染色效果。

5、CFSE易被水解，在水溶液中会变质。母液请在使用过程中避免接触水。工作液在标记细胞的过程中和水接触是在许可的时间范围内的。

6、CFSE溶解液在4℃、冰浴等较低温度情况下会凝固而粘在离心管管底、管壁或管盖内，可以37C水浴片刻至全部融解后使用。

7 CFSE标记细胞仅需5-15分钟即可完成。对于不同细胞，最佳标记时间需自行摸索。正式实验前，建议先做几个孔摸索染色浓度和加入CFSE试剂后的培养时间。

8、荧光染料均存在淬灭问题，请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭。

9、根据需要检测的细胞样品数，用CFSE探针稀释液将CFSE母液10倍稀释，再用HBSS缓冲液20-400倍稀释，配制成CFSE染色工作液，终浓度相当于将CFSE母液200-4000倍稀释。不同的细胞需要根据预实验结果确定最佳染色浓度。如果荧光强度弱，可以适当提高CFSE的终浓度。如果背景太高，可以适当降低CFSE的终浓度，请摸索条件找到最佳浓度。

10、将待测细胞用染色工作液重悬，至细胞浓度大约107/ml.3.在37℃培养箱中避光孵育15-30分钟。

11、离心后去上清，收集细胞，用PBS或无血清培养基洗涤细胞1-2次，最后加入PBS或无血清培养基重悬细胞。

12、取 50Oul细胞悬液，用流式细胞仪检测。

13 随后还可按照细胞的正常培养方法进行培养。可以在荧光显微镜下直接观察标记效果，也可以在培养适当时间后再用流式细胞仪检测细胞增殖，或用于其他特定实验目的的细胞荧光示踪。标记的细胞也可以用于活体动物的移植，并用荧光进行示踪。标记的细胞呈绿色荧光。

注意事项

1、正式实验前请选取几个样本做预实验，以优化实验条件，取得最佳实验效果。

2、螺旋盖微量试剂管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖和管内壁上的液体离心至管底，避免开盖时试剂损失

3、禁止与其他品牌的试剂混用，否则会影响使用效果。

4、样品或试剂被细菌或真菌污染或试剂交叉污染可能会导致错误的结果。

5、最好使用一次性吸头、管、瓶或玻璃器皿，可重复使用的玻璃器皿必须在使用前清洗并彻底清除残留清洁剂

6、实验后完成后所有样品及接触过的器皿应按照规定程序处理。