原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时，它们之间会互相影响，在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质，使细胞彼此互相促进存活和生长。如果接种的细胞密度过低，细胞之间的促生长作用很小，也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。如果接种的细胞密度过大，会导致营养物质供应不足，代谢废物积累较快需要经常换液和传代。

　　离体培养的细胞生命力比较脆弱，因此传代时细胞没有生长到培养瓶底壁面积的 80%以前，不要急于传代。

　　由于原代培养中各种类型的细胞常混杂生长，传代时不同细胞又不同的消化时间，因而要根据需要注意及时处理。

　　对贴壁细胞消化后的吹打过程要有序进行，要从一边开始到另一边结束，尤其是器皿的四角处， 确保瓶皿底壁各处的细胞都被吹打脱离。 吹打时动作不宜过猛， 吹出液体的力度要适中，否则会直接损伤细胞并产生能伤害细胞的气泡。

　　对于贴壁能力较弱，容易脱壁的细胞，可以不经蛋白酶原消化处理和终止消化这两步，直接对原代培养物或经漂洗后用吸管进行吹打使细胞脱离瓶皿底壁。 这种直接吹大的方法对生命力旺盛的细胞如某些肿瘤细胞较为合适。 高强度机械吹打易对细胞造成伤害较大， 细胞也常有较大数量的丢失， 因而绝大部分贴壁生长的细胞需消化后才能吹打， 一般不单独采用高强度机械吹打。

　　传代时适当增大接种的细胞密度，使培养的细胞间尽快发生相互作用，有利于传代细胞的存活。

　　传代数是指对培养物传代的次数，它不等于细胞分裂的次数或细胞的代数，而仅代表传代操作的次数。

　　传代对细胞的影响或伤害程度仅次于将活细胞从生物体内取出并进行原代培养的程度。只是因为传代后的细胞生长并不像刚开始原代培养时那样缓慢罢了。

　　每经过一次传代，细胞的生长环境就相应发生一次较大变化。体外生长的细胞若处于动荡的生活环境中， 细胞的遗传特性往往容易发生改变。 经过多次传代培养的细胞， 往往容易转化为恶性细胞。 因此， 传代对细胞生长和性状会产生不利影响， 一般情况下要尽可能减少传代次数。